пїњ

–ј«–јЅќ“ ј ћ≈“ќƒ» » ќѕ–≈ƒ≈Ћ≈Ќ»я ѕќЋ»ћќ–‘»«ћј √≈Ќј јѕќЋ»ѕќѕ–ќ“≈»Ќј(ј) G/A(-772) » »«”„≈Ќ»≈ ≈√ќ –ќЋ» ¬ ѕј“ќ√≈Ќ≈«≈ »Ў≈ћ»„≈— ќ… ЅќЋ≈«Ќ» —≈–ƒ÷ј ” ѕј÷»≈Ќ“ќ¬ ѕќ—Ћ≈ —“≈Ќ“»–ќ¬јЌ»я  ќ–ќЌј–Ќџ’ ј–“≈–»…

–азработка методики определени€ полиморфизма гена аполипопротеина(а) —/ј(-772) и изучение его роли в патогенезе ишемической болезни сердца у пациентов после стентировани€ коронарных артерий
ё.¬. —коуобогатова.1 јЋ. —ошнев.2
*‘√” Ќ»»  ардиологии им. ¬?ј. јлмазова, —анкт-ѕетербург. 2—анкт-ѕетербургский государственный университет.
–езюме
¬ проведенном обсервационном клиническом исследовании у 80 пациентов, прошедших операцию коронарной ангиопластики со стентированием, изучены биохимические маркеры и показатели воспалени€. –азработана оригинальна€ методика определени€ аллельного варианта однонуклеотидного полиморфизма G/A -772 промоторной области гена јѕќ(а). ¬первые показана роль данного полиморфизма в регул€ции концентрации липопротеина (а) (Ћп(а)) в плазме крови. ¬первые установлена св€зь систем транспорта липидов крови и Ћп(а) у пациентов с рестенозом после операции коронарного стентировани€. ¬ы€влено прогностически благопри€тное значение повышени€ уровн€ апопротеина ј1 после стентировани€. »зучена св€зь белков острой фазы с клинической и коро-нарографической картиной ишемической болезни сердца. ѕолученные данные могут быть использованы как в фундаментальных исследовани€х атеросклеротического процесса, так и в клинической практике при оценке прогноза ишемической болезни сердца и выборе метода хирургического вмешательства и терапии.
 лючевые слова: полиморфизм, стентирование коронарных артерий, апопротеин.
The Method of apolipoprotein(a) Gene G/A - 772 Polymorphism Detection and the Study of ItТs Role in Coronary Heart Disease in intercoronary Stent Placement
J.V. Skorobogatova1, A.A. Soshnev2.
СV.A. Almazov Russian Reseach Institute for Cardiology.
2St-Petersburg State University.
Resume
The present study evaluates plasma lipid profile and inflammatory proteins, including lipoprotein(a) [Lp(a)] and apolipoprotein(a) gene single nucleotide polymorphism (SNP) G/A located 772 b.p. upstream transcription start site, in 80 patients undergoing stenting after coronary angioplasty. A novel method of G/A polymorphism detection is described. Our study is the first one to reveal the role of G/A SNP in regulation of plasma Lp(a) levels. We describe an association of LDL and Lp(a) systems limited only to the group of patients with restenosis after coronary stenting. Plasma apolipoprotein A1 level increase after stenting was characteristic of better prognosis. The acute phase proteins are studied in association with clinical and angiographic presentation of coronary heart disease. Our data is relevant both to fundamental studies of atherosclerosis and to clinical practice, and may be used in assessment of coronary heart disease clinical course and selection of treatment options.
Key words: polymorphism, intercoronary Stent Placement, polymorphism.
¬ основе подавл€ющего большинства случаев сердеч-но-сосудистых заболеваний лежит атеросклеротическое поражение коронарных артерий [1]. ¬ насто€щее врем€ считаетс€, что в патогенезе атеросклероза важнейшую
роль играет в€лотекущий воспалительный процесс в сосудистой стенке, возникающий в результате сложных взаимодействий между модифицированными липопро-теинами, моноцитами, “-клетками и элементами сосу-
диетой стенки [2; 3]. ¬оспалительный процесс в атеросклеротической бл€шке приводит к повышению уровн€ белков острой фазы и цитокинов в плазме крови. ѕовышенный уровень —-реактивного белка (—–Ѕ) и интерлейкина 6 св€зан с риском сосудистых осложнений как у пациентов с ишемической болезнью сердца (»Ѕ—), так и у практически здоровых лиц среднего и пожилого возраста [4; 5].
ѕоказано, что —–Ѕ €вл€етс€ непосредственным участником воспалени€ при атеросклерозе. ќн непосредственно способен оказывать проатерогенное действие, вызыва€ дозозависимую экспрессию молекул адгезии, способству€ поглощению липопротеинов низкой плотности (ЋѕЌѕ) макрофагами, стимулиру€ высвобождение цитокинов (интерлейкины 1 и 6, фактор некроза опухолей а и др.), синтез эндотелина-1, активировать систему комплемента [6].  роме того, обнаружены участки повышенной концентации —–Ѕ в интиме сосудов, в области формировани€ атеросклеротической бл€шки [7]. ¬ насто€щее врем€ интенсивно изучаетс€ прогностическое значение предоперационного уровн€ —–Ѕ в крови у пациентов, проход€щих процедуру коронарной ангиопластики ( јѕ) со стентированием [8].
јльфа-1-антитрипсин (a-1-AT), гликопротеин семейства сергшнов, обусловливает до 90% общей анти-протеиназной активности плазмы и, как и —–Ѕ, €вл€етс€ чувствительным маркером воспалительного процесса. ≈го физиологическа€ функци€ заключаетс€ в угнетении эластазы нейтрофилов и других протеипаз, гидролизующих структурные белки соединительной ткани и, следовательно, в ограничении протеолитического повреждени€ тканей. Ќар€ду с антитромбином III и гепарином, a-1-AT обладает свойствами физиологических антикоагул€нтов. —уществуют единичные сообщени€ взаимосв€зи концентрации a-1-AT с риском развити€ и клиническим течением инфаркта миокарда [9]. ¬ тоже врем€, нет данных о св€зи a-1-AT с развитием рестеноза и течением »Ѕ— после стентировани€.
¬едуща€ роль гиперхолестеринемии в развитии атеросклероза была впервые установлена работами Ѕ.¬. ’алатова и H.H. јничкова еще в начале XX века. ќднако хорошо известно, что у лиц с одинаково повышенным уровнем холестерина плазмы крови клинические про€влени€ атеросклероза варьируют в самых широких пределах [10]
¬ плазме крови человека холестерин транспортируетс€ в составе липопротеиновых комплексов, различающихс€ по размеру, структуре и физиологической функции. —войства липопротеинов в пределах одного класса могут варьировать от проатерогенных до антиатеро-генных и от провоспалительных до противовоспалительных f 11.1.
Ћипопротеин(а) [Ћп(а)] представл€ет отдельный класс липопротеинов плазмы крови человека и, согласно многочисленным исследовани€м, €вл€етс€ независимым фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний [12].
Ћп(а) оказывает патогенное воздействие при уровне в плазме крови 0,07-0,1 мкмоль/л (20-30 мг/дл), что составл€ет около 1/5 от считающегос€ клинически значимым уровн€ ЋѕЌѕ. ѕри этом Ћп(а) схож с ЋѕЌѕ по содержанию холестерина, фосфолипидов и наличию
аполипопротеина ¬-100 (апо ¬-100), главного лиганда рецепторов ЋѕЌѕ. ќтличительной чертой Ћп(а) €вл€етс€ второй апо-белок, ковалентно св€занный с Ano ¬-100 и известный как аполипопротеин (а) [апо(а)]. ¬ зависимости от аллельного варианта гена јѕќ(а) молекул€рна€ масса белка варьирует от 250 до 800 кƒа, описан также р€д однонуклеотидных полиморфизмов кодирующей и промоторной областей гена јѕќ(а).
ѕо мнению р€да авторов, в отличие от уровн€ ЋѕЌѕ, концентраци€ Ћп(а) в плазме крови €вл€етс€ посто€нным наследуемым признаком и находитс€ под контролем единственного локуса [13; 14], расположенного в длинном плече 6 хромосоы (6q26-q27), где картирован ген јѕќ(а) [15]. —огласно другим данным, однако, Ћп(а) может рассматриватьс€ как липопротеиновый компонент острофазного ответа, а концентраци€ его в плазме крови может увеличиватьс€ при развитии воспалительной реакции [16]. ƒанные наших предыдущих исследований о св€зи высоких концентраций —–Ѕ и Ћп(а) также косвенно подтверждают последнюю гипотезу [17].
”становлена св€зь повышени€ уровн€ Ћп(а) в плазме крови с увеличением риска развити€ инфаркта миокарда [18], атеросклерозом сосудов головного мозга, сосудов нижних конечностей, а также окклюзией шунтов после аорто-коронарного шунтировани€ [19]. ќдпако, учитыва€ значительную гетерогенность апо(а) и Ћп(а), оценка риска развити€ сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений на основании данных исключительно о концентрации частицы в плазме крови представл€етс€ затруднительной [12, 18].
¬заимосв€зь полиморфизмов белка апо(а) и гена јѕќ(а) с клинической и ангиографической картиной »Ѕ— практически не изучена. ќписано два полиморфизма числа тандемных повторов в промоторной и кодирующей област€х гена јѕќ(а), св€занных с вариабельностью концентрации Ћп(а) в плазме крови и размером частицы, а следовательно, и с атерогенностью Ћп(а) [20; 21]. »звестно также, что в регул€ции уровн€ Ћп(а) в плазме крови принимают участие однонуклеотидные полиморфизмы промоторной области [22], а атероген-ность Ћп(а) может зависеть от полиморфизмов лизин-св€зывающего кармана белка апо(а) [23]. ќднонуклео-тидпый полиморфизм промоторной области G/A, располагающийс€ 772 п.о. апстрим точки начала транскрипции (G/A -772), впервые описан в работе Puckey et al., 1997. ƒл€ него показана св€зь с расовой принадлежностью и веро€тное сцепление с другими полиморфизмами промоторной области гена јѕќ(а) [24]. ќднако, до насто€щего времени не известна роль данного полиморфизма в развитии »Ѕ—, развитии нарушений липидного обмена, не разработан доступный метод дл€ определени€ этого полиморфизма на основе полимеразной цепной реакции (ѕ÷–).
÷ель исследовани€:
–азработать методику определени€ аллельного варианта однонуклеотидного полиморфизма G/A -772 промоторной области гена јѕќ(а) и изучить роль данного полиморфизма в регул€ции концентрации Ћп(а) в плазме крови и развитии осложнений после операции коронарного стентировани€ с учетом динамики изменени€ биохимических маркеров (холестерин (’—) ЋѕЌѕ, ’—
Ћѕ¬ѕ, апопротеины ј1 и ¬-100) и показателей воспалени€ (—-реактивный белок и а-1-антитрипсин).
ћатериалы и методы:
ќбследовано 80 пациентов до и через 6-9 мес€цев после процедуры  јѕ со стентированием, без осложнений в раннем послеоперационном периоде. ¬се пациенты мужского пола, страдающие »Ѕ— (стабильна€ стенокарди€ напр€жени€ I-III функционального класса). —редний возраст пациентов составил 52,4 ± 5,4 лет, продолжительность анамнеза »Ѕ— от 6 мес€цев до 5 лет. »нфаркт миокарда (»ћ) в анамнезе у 18 пациентов (47,5%), повторный »ћ у 6 пациентов (7,5%). ќт€гощенна€ наследственность по »Ѕ— у 30 пациентов (38%). —опутствующа€ артериальна€ гипертензи€ вы€влена у 70 пациентов (88%).  урение отметили 30 пациентов (38%). Ќа момент начала исследовани€ у всех пациентов был ангиографически верифицирован стеноз (сужение просвета на 50% и более) одной или нескольких коронарных артерий. ¬ ходе коронарной ангиопластики со стентированием всем пациентам был установлен стент без покрыти€.
 ритерии исключени€: острый инфаркт миокарда, острые нарушени€ мозгового кровообращени€ (ќЌћ ), сахарный диабет т€желого течени€, системные заболевани€, печеночна€ и почечна€ недостаточность, сердечна€ недостаточность III и IV функциональных классов, посто€нна€ форма мерцательной аритмии и острые инфекционные заболевани€.
 ровь дл€ исследовани€ забирали у пациентов утром натощак в день проведени€ процедуры стентировани€. Ѕиохимические показатели (апопротеип ¬, апопротеин ј1, Ћп(а), —–Ѕ и a-1-AT) в сыворотке крови определ€ли высокочувствительным иммунотурби-диметрическим методом.  онцентрацию ’— и “√ в сыворотке крови определ€ли ферментативным колориметрическим методом, ’— ЋѕЌѕ и ’— Ћѕ¬ѕ - пр€мым ферментативным методом.  оэффициент атеро-генности рассчитывали по формуле акад. ј.Ќ.  лимова. ѕовторное лабораторное исследование проводили через 6-9 мес€цев после стентировани€. »змерени€ выполн€ли на автоматическом биохимическом анализаторе Hitachi-902 с применением реактивов и контрольных материалов фирм УRocheФ (Ўвейцари€) и УRandoxФ (¬еликобритани€).
ƒЌ  дл€ генетических исследований выдел€ли из лейкоцитов периферической крови по оригинальному протоколу (модификаци€ фенол-хлороформного метода). ƒл€ амплификации исследуемой области гена јѕќ(а) разработали оригинальный протокол ѕ÷–. ѕраймеры были заказаны и синтезированы в компании У—интолФ (ћосква). ƒл€ рестрикционного анализа использовали эндонуклеазы рестрикции производства компании У—ибЁнзимФ (Ќовосибирск). јнализ термодинамических свойств и последовательностей гена апо(а), праймеров, ѕ÷–-продуктов проводили в программах Vector NTI Advance 9.0 (InforMax, Invitrogen) и UCSC In-Silico PCR (http://www.genoine.ucsc.edu).
—татистическую обработку результатов проводили с использованием пакетов программ Statistica 6.0 (StatSoft Inc.) и Excel 2002 (Microsoft Inc.).
–езультаты и обсуждение:
ѕо данным предоперационной коронарографии пациенты были разделены на 2 группы: в первую группу вошли пациенты с поражением одного сосуда (39 человек, 49%), во вторую - пациенты с поражением 2-3 артерий (41 человек, 51%). ¬ зависимости от течени€ послеоперационного периода пациенты разделены на три группы: 1 - благопри€тное течение послеоперационного периода без признаков стенокардии (п = 29), 2 - клинические про€влени€ стенокардии (п = 35), 3 - развитие коронароангиографически подтвержденного рестеноза в стенте (п = 16).
ƒл€ вы€влени€ предоперационных факторов, вли€ющих на течение »Ѕ— после стентировани€ были проанализированы клинические, биохимические и генетические показатели. ”становлено, что в обследуемой группе больных наблюдалась умеренна€ гиперхолесте-ринеми€ (5,54 ± 0,26 ммоль/л), умеренное повышение уровн€ ’— ЋѕЌѕ (3,38 ± 0,14 ммоль/л), погранична€ гипертриглицеридеми€ (1,9 ± 0,12 ммоль/л), концентраци€ ’— Ћѕ¬ѕ (1,14 ± 0,04 ммоль/л) приближалась к нижним значени€ нормы.  оэффициент атерогенности составил 3,47 ± 0,14, что характерно дл€ больных »Ѕ—. ”ровень апопротеина ¬ составил в среднем 101 мг/дл, т.е. пе достигал значимо опасного уровн€. ќтношение јпо¬/јпој1 было благопри€тным и составило 0,74. »сходные показатели липидного обмена и апопротеины пе отличались между группами и не были св€заны с течением »Ѕ— в послеоперационном периоде.
ѕри коррел€ционном анализе в общей группе (до операции) получены ожидаемые коррел€ции между уровнем ’— и ’— ЋѕЌѕ (г = 0,95; р < 0,001), коэффициентом атерогенности (г = 0,52; р < 0,001), уровнем јпо ¬-100 (г = 0,84; р < 0,001). ќбратна€ коррел€ци€ также вы€влена между уровнем ’— Ћѕ¬ѕ и коэффициентом атерогенности (г = -0,56; р < 0,001).
»сследование биохимических показателей через 6-9 мес€цев после коронарного стентировани€ показало, что в группах без рестеноза после операции значимо повышалась концентраци€ апопротеина ј1. —ледует отметить, что изменение уровн€ апопротеина ¬-100 св€зано с равнонаправленным изменением уровн€ ’— ЋѕЌѕ и зависит от четкого, контролируемого приема препаратов группы статинов. »зменение концентрации апопротеина ј1 в сторону увеличени€ не св€зано с приемом статинов и наблюдалось только в группе пациентов без рестеноза. (“абл. 1). ”читыва€ общепризнанную роль Ћѕ¬ѕ в обратном транспорте холестерина, и, соответственно, јпо ј1 как протекторного апобелка [25], впервые полученные данные о снижении јпо ј1 у пациентов с рестенозом относительно группы без рестеноза позвол€ют предположить роль нарушени€ процессов транспорта ’— и жирных кислот в развитии рестеноза после коронарного стентировани€.
—редн€€ концентраци€ —–Ѕ в общей группе составила 11,8 ± 1,96 мг/л и не измен€лась после операции коронарного стентировани€. ќднако, сравнение данного показател€ в группах больных с разным количеством пораженных сосудов показало, что уровень —–Ѕ значимо выше у пациентов с поражением 2-3 сосудов (р <
0,001) (–ис. 1 ј)  роме того, показано, что уровень —–Ѕ
ƒ»Ќјћ» ј »«ћ≈Ќ≈Ќ»я Ѕ»ќ’»ћ»„≈— »’ ѕќ ј«ј“≈Ћ≈… ѕќ—Ћ≈ ќѕ≈–ј÷»»  ќ–ќЌј–ќјЌ√»ќѕЋј—“» » —ќ —“≈Ќ“»–ќ¬јЌ»≈ћ
“аблица 1
√руппа без рестеноза (п = 64) √ руппа с рестенозом (п = 16)
ƒо операции ѕосле операции ƒо операции ѕосле операции
’— ЋѕЌѕ (ммоль/л) 3,15 ± 0,14 3,4 ±0,15 3,4 ± 0,27 3,46 ± 0,32
’— Ћѕ¬ѕ (ммоль/л) 1,13 ±0,04 1,34 ±0,05 1,2 ±0,07 1,16 ±0,06
јпо ¬-100 (мг/дл) 100,4 ±4,8* 121,6 ±6,0* 106,65 ± 11 105,8 ±12,3
јпо ј1 (мг/дл) 136,9 ±5,5+ 166,0 ± 5,9517+ 145,5 ±7,7 140,2 ± 6,7ф
јпо ¬/ј 0,74 ± 0,03 0,75 ± 0,04 0,74 ± 0,07 0,74 ± 0,07
ѕарный двухвыборочный 1-тест —тьюдента: р = 0,01 (*), р = 0,001 (+). ƒвухвыборочный 1:-тест —тьюдента: р = 0,01 (ф)
был достоверно выше у пациентов с клиническими признаками стенокардии в первые мес€цы после стентировани€ (р < 0,001) а также у пациентов с развившимс€ впоследствии рестенозом (р < 0,001), по сравнению с пациентами с благопри€тным течением послеоперационного периода (–ис. 1Ѕ)
“аким образом, повышенный уровень —–Ѕ св€зан с более т€желым течением атеросклеротического процесса. ¬ исследуемой группе пациентов отмечено значительное повышение —–Ѕ, достоверно св€занное с прогрессированием »Ѕ— и развитием рестепоза. Ёти результаты согласуютс€ с данными, полученными в ходе проспективных исследований —-реактивного белка при сердечно-сосудистых заболевани€х [5], и подчеркивают
необходимость об€зательного лабораторного исследовани€ —–Ѕ в данной группе пациентов до стентировани€.  роме того, важную роль в медикаментозной подготовке пациентов должны играть препараты группы стати-нов, известные плеотропным противовоспалительным действием.
 онцентраци€ а-1-ј“ в исследуемых группах до стентировани€ достоверно не различалась. ќднако, анализ данных через 6-9 мес€цев показал достоверное различие (р = 0,05) между концентрацией а-1-ј“ до и после стентировани€ в группе пациентов с развившемс€ рестенозом (145,7 + 8,55 мг/дл и 129,44 + 8,09 мг/дл, соответственно) (–ис. 1¬).  оррел€ционный анализ показал обратную зависимость между уровн€ми а-1-ј“ и ’— Ћѕ¬ѕ (г = -
ј ƒо операции ѕосле операции Ѕ ƒо операции ѕосле операции
¬ ƒо операции ѕосле операции
–ис. 1.
ј.  онцентраци€ —–Ѕ у больных »Ѕ— с одним и несколькими пораженными сосудами. Х - группа с поражением одного сосуда; - группа с поражением нескольких сосудов. –азличие между группами достоверно при р < 0,001. Ѕ. ”ровень —–Ѕ в грунпах пациентов с различным течением »Ѕ—. Х - группа без клиники стенокардии; ÷ - группа с клиническими про€влени€ми стенокардии; ј - группа с документированным рестенозом. –азличие между группой без стенокардии и группами со стенокардией и рестенозом достоверно при р < 0,001 ¬. ƒинамика концентрации а-1-антитрипсина у пациентов с »Ѕ— до и после коронарного стентировани€. Х - группа без клиники стенокардии; - группа с клиническими про€влени€ми стенокардии; ј - группа с документированным рестенозом. –азличи€ между группами без рестеноза и с рестенозом считали достоверными при р < 0,05.
0,37, р < 0,02) и €-1-AT и Ano ј1 (г = -0,39, р < 0,02) в общей группе. ќбратна€ коррел€ци€ между €-1-AT и ’— Ћѕ¬ѕ была наиболее выражена в группе пациентов с рестенозом (г = -0,68, р < 0,05). ќчевидно, данна€ зависимость отражает указанное на –ис. 1¬ общее снижение а-1-ј“ в послеоперационном периоде у пациентов с рестенозом. ¬озможно, снижение концентрации a-1-AT в крови отражает недостаток или истощение защитной системы ингибиторов протеолитических каскадов у больных с неблагопри€тным течением заболевани€.
—редн€€ концентраци€ Ћп(а) у исследуемых пациентов составила 30,7 ± 5,25 мг/дл. —татистический анализ не показал различий между уровн€ми Ћп(а) плазмы крови у исследуемых больных в группах с однососудистым и многососудистым поражением коронарных артерий. Ќе обнаружено также достоверных различий в исходной концентрации Ћп(а) у пациентов с возобновившимис€ после вмешательства приступами стенокардии и у пациентов с благопри€тным послеоперационным течением (31,4 ± 6,8 мг/дл и 25,6 ± 7,4 мг/дл, соответственно). ¬ тоже врем€, показано достоверное различие (р = 0,05) в исходных концентраци€х Ћп(а) у пациентов с развившимс€ рестенозом и пациентов с благопри€тным клиническим течением »Ѕ— (33,0 + 8,5 мг/дл и 25,6 ± 7,4 мг/дл, соответственно).
¬ажно отметить, что уровень Ћп(а) в общей группе и группе без рестеноза не коррелировал с уровнем холестерина ЋѕЌѕ (полученным при пр€мом измерении или расчетным методом) и не был св€зан с уровнем јпо ¬-100. ќднако в группе рестеноза получена достоверна€ коррел€ци€ уровн€ Ћп(а) с уровнем холестерина ЋѕЌѕ (г = 0,37 до операции, г = 0,43 после операции; р < 0,05) и јпо ¬-100 (г = 0,37 до операции, г = 0,40 после операции; р < 0,05), что может говорить о наличии св€зи между системами Ћп(а) и ЋѕЌѕ у пациентов с осложнени€ми после стентировани€ и о возможной роли этой св€зи в патогенезе рестеноза.
ƒл€ исследовани€ однонуклеотидного полиморфизма G/ј промотерной области в положении -772 от точки начала транскрипции мы разработали оригинальную методику √»ƒ– и рестрикционного анализа. — использованием базы данных GenBank были сконструированы праймеры:
5-CTGCACATCCATAGCCTCCCTC
5'-CCACCGCACTCGACCCTCTG
ѕ÷– проводили при концентрации праймеров в реакционной смеси 0,075 мкмоль каждого, температура отжига праймеров (“ ) составила 55,4∞ —, температура элонгации (“ )
68∞ —. –еакци€ выходила на плато после 30 циклов. ƒалее ѕ÷–-продукт обрабатывали специфичной к сайту TACGA эндонуклеазой рестрикции Taq I (5 ≈ƒ па 20 у1 ѕ÷–-продукта) в течение 2 часов при температуре 65∞
—. ѕродукты рестрикции исследовали с помощью электрофореза в 2% агарозном геле (30 мин., 100 V). ѕри генотипе G определ€етс€ 2 фрагмента, соответствующих 497 и 209 п.о.
ѕри генотипе ј сайт рестрикции от-
м
–ис. 2.
–езультаты электрофореза продуктов рестрикции амплифи-цированного фрагмента гена јѕќ(а), содержащего полиморфизм G/A -772. ќкраска этиди€ бромидом. 1 - гомозигота G/G; 2 - гетерозигота G/ј; 3 - гомозигота ј/ј; ћ - маркеры молекул€рной массы.
сутствует, поэтому определ€етс€ единственный фрагмент длиной 706 п.о. –епрезентативные результаты рестрикции представлены на –ис. 2
–аспределение аллелей G и ј в исследуемой попул€ции соответствовало уравнению ’арди-¬айнберга. ƒостоверных различий между группами пациентов по генотипу ј/G не обнаружено. ќднако, показано достоверное различие концентраций Ћп(а) между гомозиготами ј/ј и G/G, что может свидетельствовать о роли данного полиморфизма в регул€ции транскрипции гена јѕќ(а), либо о сцеплении его с другим, не изученным нами полиморфизмом, причем аллель G св€зана с более высоким уровнем Ћп(а). ћедиана уровн€ Ћп(а) у гомозигот ј/ј до операции составл€ла 23 мг/дл, а у гомозигот G/G - 30,9 мг/дл (различи€ достоверны при р < 0,05). ”ровень Ћп(а) в группе гетерозигот G/ј колебалс€ в широких пределах (медиана 17 мг/дл) и статистически не отличалс€ от уровней Ћп(а) у гомозигот. ѕредоперационные и послеоперационные уровни Ћп(а) между гомозиготами и гетерозиготами также достоверно не различались. –аспределение уровней Ћп(а) в плазме крови в зависимости от аллельного варианта полиморфизма G/ј представлено на –ис. 3.
I
50 60 70 80 90
 онцентраци€ Ћп(а)
100 110 120 130
I G/G ј/ј » G/A
–ис. 3
”ровень Ћгт(а) в плазме крови в зависимости от аллельного варианта полиморфизма ќ/ј
¬ыводы:
1. ¬первые показано достоверное повышение концентрации Ћѕ(а) в группе гомозигот G/G по сравнению с гомозиготами ј/ј (однонуклеотидный полиморфизм промотерной области 772 п.о. 5Т от точки начала транскрипции), что может свидетельствовать о роли данного полиморфизма в регул€ции активности промотора гена јѕќ(а) либо о его сцеплении с другим, не изученным ранее полиморфизмом.
2.  оррел€ци€ между уровн€ми Ћп(а) и холестерина ЋѕЌѕ, а также Ћп(а) и јпо ¬-100 в группе пациентов с развившимс€ рестенозом, но не в группах пациентов без рестеноза, свидетельствует о наличии патологической св€зи между системами Ћп(а) и ЋѕЌѕ у пациентов с осложнени€ми стентировани€ и о роли этой св€зи в развитии рестеноза.
3. ¬первые обнаруженное снижение концентрации a-1-AT в крови у больных с развившимс€ рестенозом коронарных артерий отражает истощение защитной системы ингибиторов протеолитических каскадов у больных с неблагопри€тным течением заболевани€. ƒинамика уровн€ —–¬ подтверждает роль белков-участников острой фазы в прогрессировании »Ѕ—.
4. Ќормализаци€ процессов транспорта холестерина и жирных кислот играют важную роль в благопри€тном течении »Ѕ— после коронарной ангиопластики со стентированием.
Ћитература
1. Hansson G.K. Inflammation, Atherosclerosis and Coronary Artery Disease. //N Engl J Med.- 2005,- Vol. 352,- pp. 1685-1695.
2. Ross R. Atherosclerosis - An Inflammatory Disease. // N Engl J Med.- 1999,- Vol. 340,- pp. 115-126.
3. Glass C.K., Witztum J.L. Atherosclerosis: The Road Ahead. // Cell.- 2001,- Vol. 104,- pp. 503-516.
4. Ўевченко ќ.ѕ. ¬ысокочувствительный анализ —-реак-тивного белка и его применение в кардиологии. // Ћабораторна€ медицина.- 2003,- є6,- ——. 35-41.
5. Danesh J., Wheeler J.G., Hirschfield G.M. et al. C-Reactive Protein and Other Circulating Markers of Inflammation in the Prediction of Coronary Heart Disease. // N Engl J Med.- 2004,-Vol. 350,- pp. 1387-1397.
6. Hirschfield G.M., Pepys M.B. C-reactive protein and cardiovascular disease: new insights from an old molecule. // QJ Med.- 2003,- Vol. 96,- pp. 793-807.
7.  арпов ё.ј., —орокин E.B., ‘омичева ќ.ј.. ¬оспаление и атеросклероз: состо€ние проблемы и нерешенные вопросы. // —ердце,- 2003,- є4,- ——.190-193.
8. Walter D.H., Fichtlscherer S., Sell wig ћ., et al. Preprocedural C-reactive protein levels and cardiovascular events after coronary stent implantation. // J Am Coll Cardiol.- 2001.-Vol. 37.- pp. 839-846.
9. Engstrom G., Stavenow L., Hedblad B. et al. Inflammation-sensitive plasma proteins and incidence of myocardial infarction in men with low cardiovascular risk. // Arterioscler Thromb Vase Biol.- 2003,- Vol. 23,- pp. 2247-2251.
10. Hobbs H.H., Rusel D.W., Brown M.S., Goldstein J.L. The LDL receptor locus in familial hypercholesterolemia: Mutational analysis of a membrane protein. // Ann Rev Genet.- 1990,- Vol.
24,- pp. 133-170.
11. Navab ћ., Ananthramaiah G.M., Reddy S.“., et al. The double jeopardy of HDL. // Ann Med.- 2005.- Vol. 37,- pp. 173-178.
12. Danesh J., Collins R., Peto R. Lipoprotein(a) and Coronary Heart Disease Meta-Analysis of Prospective Studies. // Circulation.- 2000,- Vol. 102,- pp. 1082-1085.
13. Berg K. Genetics of Atherogenic Lipoprotein(a) and Its Relation to Other Atherosclerotic Risk Factors, pp. 211-215. In: Scanu A.M., moderator. Lipoprotein(a) and atherosclerosis. // Ann Intern Med.- 1991,- Vol.115 - pp. 209-218.
14. Scanu A.M. Lp(a) Lipoprotein - Coping with Heterogeneity. // N Engl J Med.- 2003.- Vol. 349,- pp. 2089-2090.
15. McLean J.W., Tomlinson j.E., Kuang W.-J. et al. cDNA sequence of human apolipoprotein(a) is homologous to plasminogen. // Nature.- 1.987.- Vol. 330,- pp. 132-137.
16. Min W.-K., Lee J.O., Huh J.W. Relation between lipoprotein(a) concentrations in patients with acute-phase response and risk analysis for coronary heart disease. // Clin Chem.- 1997.-Vol. 43,- pp. 1891-1895.
17. —коробогатова ё.¬. ѕоказатели воспалени€ и —-реак-тивный белок у больных »Ѕ— с подтвержденным коронарным атеросклерозом. // Ѕюллетень Ќ»»  ардиологии им. ¬.ј. јлмазова,- 2005.- т. II,- ——. 159-162.
18. Holmer S.R., Hengstenberd —., Kraft H.-G. Et al. Association of Polymorphisms of the Apolipoprotein(a) Gene With Lipoprotein(a) Levels and Myocardial Infarction. // Circulation.-2003,- Vol. 107,- 696-701.
19. Dangas G., Ambrose J.A., DТAgate DJ. et al. Correlation of Serum Lipoprotcin(a) With the Angiographic and Clinical Presentation of Coronary Artery Disease. / / Am J Cardiol.- 1999-Vol. 83,- pp. 583-5, A7.
20. Perombelon N.Y.F., Soutar A.K., Knight B.L. Variation in Lipoprotein(a) Concentration Associated with Different Apolipoprotein(a) Alleles. //J Clin Invest.- 1994,- Vol. 93,- pp. 1481-1492.
21. Mooser V., Mancini F.P., Bopp. S. et al. Sequence polymorphism in the apo(a) gene associated with specific levels of Lp(a) in plasma. // Hum Mol Genet.- 1995.- Vol. 4,- pp. 173-181.
22. Zysow B.R., Lindahl G.E., Wade D.P. et al. C/T polymorphism in the 5Т untranslated region of the apolipoprotein(a) gene introduces an upstream ATG and reduces in vitro translation. // Arterioscler Thromb Vase Biol.- 1995,- Vol. 15,- pp. 58-64.
23. Scanu A.M., Pfaffinger D., Lee J.C., Hinman J. A single point mutation (Trp72>Arg) in human apo(a) kringle 4-37 associated with a lysine binding defect in Lp(a). // Biochim Biophys Acta.- 1994,- Vol. 1227,- pp. 41-45.
24. Puckey L.H., Lawn R.M., Knight B.L. et al. Polymorphisms in the apolipoprotein(a) gene and their relationship to allele size and plasma lipoprotein(a) concentration. // Hum Mol Genet.-1997,- Vol. 6 - pp. 1099-1107.
25. Kontush A., Chapman M.J. Antiatherogenic small, dense HDL - guardian of the arterial wall. // Nat Clin Pract Cardiovasc Med.- 2006,- Vol. 3,- pp. 144-153.

пїњ