пїњ

–ј«–јЅќ“ ј ћ≈“ќƒ» »  ќЋ»„≈—“¬≈ЌЌќ√ќ ќѕ–≈ƒ≈Ћ≈Ќ»я —”ћћј–Ќќ√ќ —ќƒ≈–∆јЌ»я ‘Ћј¬ќЌќ»ƒќ¬ ¬ “–ј¬≈ ѕ”—“џ–Ќ» ј —ѕ≈ “–ќ‘ќ“ќћ≈“–»„≈— »ћ ћ≈“ќƒќћ

”ƒ  615.322
–ј«–јЅќ“ ј ћ≈“ќƒ» »  ќЋ»„≈—“¬≈ЌЌќ√ќ ќѕ–≈ƒ≈Ћ≈Ќ»я —”ћћј–Ќќ√ќ —ќƒ≈–∆јЌ»я ‘Ћј¬ќЌќ»ƒќ¬ ¬ “–ј¬≈ ѕ”—“џ–Ќ» ј —ѕ≈ “–ќ‘ќ“ќћ≈“–»„≈— »ћ ћ≈“ќƒќћ
© «иэп “. “. Ќго, ≈.¬. ∆охова
—анкт-ѕетербургска€ государственна€ химико-фармацевтическа€ академи€, ул. ѕрофессора ѕопова, 14, —анкт-ѕетербург, 197376 (–осси€)
E-mail: caltha@mail.ru
ѕредложено проводить оценку качества травы пустырника п€тилопастного (Leonurus quinquelobatus Gilib.j и травы пустырника €понского (Leonurus japonicus Houtt.j по содержанию суммы флавоноидов с использованием метода дифференциальной спектрофотометрии. »зучены услови€ извлечени€ флавоноидов из сырь€. ќпределена оптическа€ плотность окрашенного комплекса с алюмини€ хлоридом при длине волны 400 нм дл€ травы пустырника п€тилопастного и 410 нм дл€ травы пустырника €понского. —одержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид в траве L. quinquelobatus в разные фазы вегетации составило 1,01-1,37%. —одержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в траве L. japonicus из разных мест произрастани€ составило 0,81-2,71%. ќтносительна€ ошибка предложенной методики - 1,51 и 1,54% соответственно.
¬ведение
–од пустырник (Leonurus L.) включает около 25 видов, произрастающих по всему миру: в ≈вропе, јзии, јфрике и јмерике; 13 видов встречаютс€ на территории –оссии [1]. ¬ ‘армакопею XI издани€ [2] включена трава пустырника (производ€щие растени€: пустырник сердечный - L. cardiaca L. и пустырник п€тилопастный - L. quinquelobatus Gilib.), препараты которой примен€ютс€ в качестве седативного средства. »зменение є5 к частной статье √‘ XI предусматривает оценку качества сырь€ травы пустырника по содержанию иридоидов в пересчете на √осударственный стандартный образец (√—ќ) гарпагида ацетата, который €вл€етс€ недоступным дл€ многих лабораторий.
ѕод тем же названием Herba Leonuri в ‘армакопеи ¬ьетнама и  ита€ включена трава пустырника €понского - L. japonicus Houtt., котора€ используетс€ в составе многих гинекологических и утеротонических сборов, а метод количественного определени€ содержани€ действующих веществ в сырье и препаратах пустырника €понского вообще отсутствует.
’имический состав сырь€ указанных видов пустырника разнообразен и представлен флавоноидами, алкалоидами, кумаринами, дубильными веществами, терпеновыми соединени€ми [3-6]. —реди этого комплекса биологически активных веществ особо выдел€ютс€ флавоноиды как группа соединений, имеюща€ широкий спектр фармакологической активности.
÷ель насто€щего исследовани€ - разработка методики количественного определени€ суммы флавонои-дов в траве пустырника п€тилопастного и траве пустырника €понского с использованием метода дифференциальной спектрофотометрии.
* јвтор, с которым следует вести переписку.
Ёкспериментальна€ часть
ќбъектами исследовани€ послужили образцы сырь€ пустырника п€тилопастного, культивируемого в Ћенинградской области (питомник лекарственных растений —ѕ’‘ј), а также образцы пустырника €понского, произрастающего на территории ¬ьетнама,  ита€ и культивируемого в Ћенинградской области. “раву заготавливали в разные фазы вегетации, среза€ олиственные верхушки побегов длиной до 40 см и толщиной стебл€ не более 0,5 см. —ушку осуществл€ли воздушно-теневым способом, разложив сырье тонким слоем и периодически переворачива€. «атем сырье измельчали и просеивали через сито с диаметром отверстий 1, 2 и 5 мм. ¬лажность сырь€ определ€ли по методике √‘ XI [7]. —татистическую обработку результатов проводили по общеприн€той методике [7].
ћетодом хроматографии в тонком слое сорбента с использованием пластин ЂSorbfil-ѕ“—’-ѕ-ј-”‘ї в системе хлороформ-этилацетат-кислота уксусна€ (4 : 10 : 5) установили, что одним из основных компонентов суммы флавоноидов, присутствующих в траве пустырника п€тилопастного, €вл€етс€ цинарозид, а в траве пустырника €понского - рутин. Ќа регистрирующем спектрофотометре ЂShimadzuї (япони€) - ЂUV 1240 miniї снимали спектры спиртовых извлечений из образцов сырь€ в диапазоне длин волн от 360 до 450 нм. ћаксимум поглощени€ окрашенного комплекса спиртового извлечени€ из травы пустырника п€тилопастного с раствором алюмини€ хлорида наблюдалс€ при длине волны 400±2 нм. јналогичный максимум поглощени€ отмечен дл€ комплекса √—ќ цинарозида (лютеолин-7-глюкозид) с алюмини€ хлоридом (рис. 1). ћаксимум поглощени€ окрашенного комплекса спиртового извлечени€ из травы пустырника €понского с раствором алюмини€ хлорида наблюдалс€ при длине волны 410±2 нм. јналогичный максимум поглощени€ отмечен дл€ комплеса √—ќ рутина с алюмини€ хлоридом (рис. 2). Ёто дает возможность использовать длину волны 400 нм в качестве аналитической дл€ пустырника п€тилопастного и 410 нм - дл€ пустырника €понского.
ѕри разработке методики количественного определени€ суммы флавоноидов изучали услови€ экстракции в зависимости от степени измельченности сырь€, соотношени€ сырь€ и экстрагента, концентрации спирта этилового, времени экстрагировани€ и полноты комплексообразовани€ с 1% спиртовым раствором алюмини€ хлорида. Ќаиболее полное извлечение определ€емых веществ достигалось с использованием 70% спирта этилового, в образцах сырь€ со степенью измельченности 1 мм, временем экстрагировани€ 2 ч и соотношением сырь€ и экстрагента 1 : 100 (табл. 1, 2).
—табильность комплекса определ€емой суммы флавоноидов травы пустырника п€тилопастного и √—ќ цинарозида достигаетс€ после 20 мин, устойчивость комплекса сохран€етс€ в течение 15-20 мин. —табильность комплекса определ€емой суммы флавоноидов травы пустырника €понского и √—ќ рутина достигаетс€ после 40 мин, устойчивость комплекса сохран€етс€ в течение 20-30 мин.
ћетодика количественного определени€ суммы флавоноидов в траве пустырника. јналитическую пробу сырь€ измельчали до размера частиц, проход€щих сквозь сито с отверсти€ми диаметром 1 мм. ќколо 0,5 г (точна€ навеска) измельченного сырь€ помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавл€ли 50 мл 70% спирта этилового.  олбу взвешивали с погрешностью ±0,01 г, присоедин€ли к обратному холодильнику и нагревали на кип€щей вод€ной бане в течение 2 ч. ѕосле охлаждени€ до комнатной температуры колбу вновь взвешивали и доводили до первоначальной массы 70% спиртом этиловым. —одержимое колбы фильтровали через воронку диаметром 7 см с вложенным ватным тампоном, отбрасыва€ первые 20 мл фильтрата.
ƒлина волны, нм
ƒлина волны, нм
–ис. 1. —пектры поглощени€ окрашенных комплексов с алюмини€ хлоридом: 1 - раствор √—ќ цинарозида; 2 - извлечение 70% спиртом этиловым из травы пустырника п€тилопастного
–ис. 2. —пектры поглощени€ окрашенных комплексов с алюмини€ хлоридом: 1 - раствор √—ќ рутина; 2 - извлечение 70% спиртом этиловым из травы пустырника €понского
“аблица 1. ¬ли€ние условий экстракции
на суммарное содержание флавоноидов в траве пустырника п€тилопастного
“аблица 2. ¬ли€ние условий экстракции
на суммарное содержание флавоноидов в траве пустырника €понского
”слови€ экстракции —одержание флавоноидов, % ”слови€ экстракции —одержание флавоноидов, %
–азмер частиц, мм –азмер частиц, мм
1,00 1,01 1,00 0,81
2,00 0,85 2,00 0,66
5,00 0,53 5,00 0,51
Ёкстрагент спирт этиловый, % Ёкстрагент спирт этиловый, %
40 ѕомутнение раствора, ис- 40 ѕомутнение раствора, ис-
пользуемого дл€ спектрофо- пользуемого дл€ спектрофо-
тометрии, трудность фильт- тометрии, трудность фильт-
ровани€ ровани€
70 1,01 70 0,81
95 0,88 95 0,66
—оотношение сырь€ и экстрагента —оотношение сырь€ и экстрагента
1 : 25 0,78 1 : 25 0,65
1 : 50 0,95 1 : 50 0,75
1 : 100 1,01 1 : 100 0,81
1 : 120 1,00 1 : 120 0,81
¬рем€ экстракции, мин (70% спирт этиловый, соотно- ¬рем€ экстракции, мин (70% спирт этиловый, соотно-
шение 1 : 100) шение 1 : 100)
40 0,73 40 0,64
60 0,85 60 0,73
90 0,92 90 0,77
120 1,01 120 0,81
180 0,99 180 0,80
¬ мерную колбу вместимостью 25 мл помещали 2 мл профильтрованного извлечени€, добавл€ли 2 мл 1% раствора алюмини€ хлорида в 95% спирте этиловом и доводили объем раствора 95% спиртом этиловым до метки. ƒл€ приготовлени€ раствора сравнени€ в другую колбу вместимостью 25 мл помещают 2 мл фильтрата и довод€т до метки 95% спиртом этиловым. »змерение оптической плотности проводили через 20 минут на спектрофотометре при длине волны 400 нм в кювете с толщиной сло€ 10 мм дл€ пустырника п€тилопастного и через 40 мин на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной сло€ 10 мм дл€ пустырника €понского. ѕараллельно измерили оптическую плотность раствора √—ќ цинарозида (дл€ пустырника п€тилопастного) и рутина (дл€ пустырника €понского). ƒл€ этого 2 мл 0,02% раствора стандарта помещали в мерную колбу 25 мл, прибавл€ли 2 мл 1% раствора алюмини€ хлорида и доводили до метки 95% спиртом этиловым.
—уммарное содержание флавоноидов в сухом сырье в пересчете на стандарт и абсолютно сухое сырье вычисл€ли по формуле:
X D х m0 х 50 х100 _ D0 х m х (100 - W),
где D - оптическа€ плотность испытуемого раствора; D0 - оптическа€ плотность раствора √—ќ стандарта; m - масса сырь€, г; m0 - масса √—ќ стандарта, г; W - потер€ в массе при высушивании сырь€, %.
ѕримечание. ѕриготовление раствора √осударственного стандартного образца (√—ќ) цинарозида: около
0,01 г (точна€ навеска) √—ќ цинарозида, предварительно высушенного при температуре 130-135 ∞— в течение 3 ч, раствор€ли в 85 мл 95% спирта этилового в мерной колбе местимостью 100 мл при нагревании на вод€ной бане, охлаждали, количественно переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивали.
ѕриготовление раствора √осударственного стандартного образца (√—ќ) рутина: около 0,02 г (точна€ навеска) √—ќ рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135 ∞— в течение 3 ч, раствор€ли в 85 мл 95% спирта этилового в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на вод€ной бане, охлаждали, количественно переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивали.
ќбсуждение результатов
ƒл€ проверки воспроизводимости методики проведено 8 независимых определений дл€ каждого вида сырь€. –езультаты статистической обработки свидетельствуют о том, что ошибка единичного определени€ с доверительной веро€тностью 95% не превышает 5% (табл. 3, 4).
— целью исключени€ систематической ошибки методики проведены опыты с добавками цинарозида к навеске сырь€ пустырника п€тилопастного и рутина к навеске сырь€ пустырника €понского. ”становлено, что относительна€ ошибка метода не превышает ±5%, т.е. находитс€ в пределах случайной ошибки разработанной методики, что указывает на отсутствие систематической ошибки (табл. 5, б).
–азработанна€ методика количественного определени€ суммарного содержани€ флавоноидов была апробирована на образцах сырь€ из разных мест произрастани€, заготовленных в различные фазы вегетации. Ќаиболее высокое содержание суммы флавоноидов наблюдалось в образцах сырь€ пустырника €понского, культивируемого в Ћенинградской области, и составило до 2,7б±0,04% в фазе активного роста. –езультаты представлены в таблицах 7 и 8.
“аблица 3. –езультаты количественного
определени€ суммарного содержани€ флавоноидов в траве пустырника п€тилопастного и их метрологическа€ характеристика
“аблица 4. –езультаты количественного
определени€ суммарного содержани€ флавоноидов в траве пустырника €понского и их метрологическа€ характеристика
є —одержание ћетрологическа€ є —одержание ћетрологическа€
определени€ флавоноидов, % характеристика определени€ флавоноидов, % характеристика
1 0,98 X = 1,01 1 0,83 X = 0,81
2 1,03 S = 0,0185 2 0,82 S = 0,0151
3 1,00 S x = 0,0065 3 0,82 S x = 0,0053
4 1,02 t(95%, 7) = 2,36 4 0,79 t(95%, 7) = 2,36
5 1,02 Ax = 0,0437 5 0,80 Ax = 0,0356
б 0,99 A x = 0,0153 б 0,79 A x = 0,0125
7 1,01 Ї = 4,33% 7 0,81 Ї = 4,40%
8 1,03 Ї = 1,51% 8 0,82 Ї = 1,54%
“аблица 5. –езультаты количественного определени€ суммарного содержани€ флавоноидов в траве пустырника п€тилопастного с использованием метода добавок √—ќ цинарозида
—одержание флаво-ноидов в 1 г сырь€, мг ƒобавлено √—ќ цинарозида, мг —одержание флавоноидов, мг ќтносительна€ ошибка, %
должно быть найдено
10,1 7,3 17,4 17,4 0
10,1 7,3 17,4 17,2 -1,1
10,1 14,6 24,7 24,5 -0,8
“аблица б. –езультаты количественного определени€ суммарного содержани€ флавоноидов в траве пустырника €понского с использованием метода добавок √—ќ рутина
—одержание флаво-ноидов в 1 г сырь€, мг ƒобавлено √—ќ рутина, мг —одержание флавоноидов, мг ќтносительна€ ошибка, %
должно быть найдено
8,1 4,7 12,8 12,9 +0,8
8,1 4,7 12,8 12,6 -1,6
8,2 5,3 13,5 13,9 +3,0
“аблица 7. –езультаты количественного определени€ суммарного содержани€ фланоноидов в траве пустырника п€тилопастного
ћесто сбора ƒата сбора ‘аза вегетации —одержание флавоноидов, %
Ћенинградска€ область 30.06.2006 ћассовое цветение 1,01±0,02
Ћенинградска€ область 02.08.2006 Ќачало плодоношени€ 1,37 ±0,02
“аблица 8. –езультаты количественного определени€ суммарного содержани€ фланоноидов в траве пустырника €понского
ћесто сбора ƒата сбора ‘аза вегетации —одержание флавоноидов, %
Ћенинградска€ область 09.2006 јктивный рост 2,7б±0,04
Ћенинградска€ область 09.2006 Ќачало бутонизации 2,58±0,04
ёжный  итай 06.2006 Ќачало бутонизации 1,б3±0,03
—еверный ¬ьетнам 06.2006 Ќачало бутонизации 1,73±0,03
ёжный ¬ьетнам 07.2006 ћассовое цветение 0,81±0,01
¬ыводы
1. »зучены услови€ экстракции и спектрофотометрического определени€ флавоноидов в траве пустырника п€тилопастного и траве пустырника €понского.
2. –азработана методика количественного определени€ суммы флавоноидов в траве пустырника п€тило-пастного в пересчете на цинарозид и траве пустырника €понского в пересчете на рутин. ќтносительна€ ошибка предложенной методики составила 1,51 и 1,54% соответственно.
3. ќпределено, что образцы сырь€ пустырника €понского, культивируемого в Ћенинградской области, имеют довольно высокое содержание флавоноидов в сравнении с образцами, собранными в местах естественного произрастани€ данного вида.
—писок литературы
1. „ерепанов —. . —осудистые растени€ –оссии и сопредельных государств (в пределах бывшего ———–). —ѕб., 1995. 989 с.
2. √осударственна€ фармакопе€ ———–. XI издание. ¬ып. 2. ћ., 1990. 398 с.
3. –астительные ресурсы ———–. ÷ветковые растени€, их химический состав, использование. —ем. Hippuridaceae -Lobeliaceae. —ѕб., 1991. 198 с.
4. Phan Minh Giang, Phan Tong son, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki Otsuka. New Labdane-Type Diterpenoids from Leonurus heterophyllus Sw. // Chem.Pharm.Bull. 2005. V. 53. є8. P. 938-941.
5. Phan Minh Giang, Phan Tong son, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki Otsuka. New Bis-spirolabdane-Type Diterpenoids from Leonurus heterophyllus Sw. // Chem.Pharm.Bull. 2005. V. 53. є11. P. 1475-1479.
6. Chao Z., Ma L.L., Zhou X.J. Determination of stachydrine and leonurine in Herba Leonuri by ion-pair reserved-phase high-performance liquid chromatography // Di Yi Jun Da Xue Xue Bao. 2004. V. 24. є11. P. 1223-1226.
7. √осударственна€ фармакопе€ ———–. XI издание. ¬ып. 1. ћ., 1987. 334 с.
ѕоступило в редакцию 7 апрел€ 2007 г.

пїњ